徳島大学 教育・研究者情報データベース(EDB)

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著作: Kaji Hiroyuki/Yada-Wakatabe Rumi/Uehira Takashi/Terai Mayumi/Takeda Atsushi/[佐藤 高則]/Samejima Tatsuya/Molecular cloning, Enhancement of Expression Efficiency and Site-Directed Mutagenesis of Rat Epidermal Cystatin A./[The Journal of Biochemistry]

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EID
65120
EOID
933818
Map
0
LastModified
2018年12月3日(月) 13:08:11
Operator
大家 隆弘
Avail
TRUE
Censor
0
Owner
佐藤 高則
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継承
種別 必須 学術論文(審査論文)
言語 必須 英語
招待 推奨
審査 推奨 Peer Review
カテゴリ 推奨 研究
共著種別 推奨
学究種別 推奨
組織 推奨
  1. 青山学院大学.理工学部
  2. 東京都立大学
  3. 昭和大学
著者 必須
  1. (英) Kaji Hiroyuki
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  2. (英) Yada-Wakatabe Rumi
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  3. (英) Uehira Takashi
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  4. (英) Terai Mayumi
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  5. (英) Takeda Atsushi
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  6. 佐藤 高則
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  7. (英) Samejima Tatsuya
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
題名 必須

(英) Molecular cloning, Enhancement of Expression Efficiency and Site-Directed Mutagenesis of Rat Epidermal Cystatin A.

副題 任意
要約 任意

(英) A rat cystatin A cDNA clone was isolated from a lambda ZAP library representing newborn rat skin mRNA by screening with a synthetic oligonucleotide designed from amino acid sequence 15-23 of the cysteine proteinase inhibitor. The obtained clone contained a partial coding region of the inhibitor, lacking the 5'-untranslated region and coding sequence for the NH(2)-terminal 13 residues. The amino acid sequence deduced from the base sequence, Glu14-Phe103, coincided with that determined at the amino acid level. To obtain the recombinant cystatin A protein, the DNA was fused with a synthetic linker encoding its missing N-terminal 17 residues and introduced into an expression vector, pMK2. In Escherichia coli, however, the expression level of the semi-synthetic gene was low, 0. 5 mg of the purified recombinant protein per 1 liter culture being produced. Changing of the codon usage of the N-terminal region in a pET-15b expression system led to an increase in the yield depending on the instability of the putative secondary structure around an initiation codon of the mRNA. The expressed cystatin A showed identical characteristics with the authentic form except for the absence of the N-terminal acetyl blocking group. Using the expression system, two kinds of point mutation, the conservative Val54 in the first loop QxVxG region being changed to Lys and Glu, were introduced, but there was almost no effect on the inhibitory activity toward papain. This suggests that the conserved Val in the reactive site is not restricted and that the hydrophobicity of the position is not essential for the activity of rat cystatin A.

(日) Rat由来システインプロテアーゼ・インヒビター(Cyatatin α) cDNAを調製し,大腸菌における発現を試みた.その結果発現量が少量であったため,遺伝子上流に存在するmRNAの二次構造を推定し,この二次構造を不安定化させる変異を導入した.その結果,大腸菌による大量発現が可能となった.さらに,ファミリーにおいて保存されているVal54について,阻害活性への関与を検討した.

キーワード 推奨
  1. (英) Amino Acid Sequence
  2. (英) Animals
  3. (英) Animals, Newborn
  4. (英) Base Sequence
  5. (英) Binding Sites
  6. (英) Cloning, Molecular
  7. (英) Cystatins
  8. (英) DNA Primers
  9. (英) DNA, Complementary
  10. (英) Escherichia coli
  11. (英) Female
  12. (英) Gene Expression
  13. (英) Molecular Sequence Data
  14. (英) Mutagenesis, Site-Directed
  15. (英) Nucleic Acid Conformation
  16. (英) RNA, Messenger
  17. (英) Rats
  18. (英) Rats, Sprague-Dawley
  19. (英) Recombinant Proteins
  20. (英) Skin
発行所 推奨 日本生化学会
誌名 必須 The Journal of Biochemistry([日本生化学会])
(pISSN: 0021-924X, eISSN: 1756-2651)
ISSN 任意 0021-924X
ISSN: 0021-924X (pISSN: 0021-924X, eISSN: 1756-2651)
Title: Journal of biochemistry
Title(ISO): J Biochem
Supplier: Oxford University Press
Publisher: Oxford University Press
 (NLM Catalog  (医中誌Web  (J-STAGE  (Scopus  (CrossRef (Scopus information is found. [need login])
必須 126
必須 4
必須 769 775
都市 任意 東京(Tokyo/[日本国])
年月日 必須 1999年 8月 6日
URL 任意
DOI 任意
PMID 任意 10502687    (→Scopusで検索)
NAID 任意
WOS 任意 000083089100020
Scopus 任意
評価値 任意
被引用数 任意
指導教員 推奨
備考 任意
  1. (英) Article.PublicationTypeList.PublicationType: Journal Article

  2. (英) Article.PublicationTypeList.PublicationType: Research Support, Non-U.S. Gov't