徳島大学 教育・研究者情報データベース(EDB)

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著作: Mizutani Yukihito/Narikawa Tatsuya/[佐藤 高則]/Sakurai Nobuhiko/Kaji Hiroyuki/Yamada Shingo/Samejima Tatsuya/A New UV Method for Serum γ-Glutamyltransferase Assay Using Recombinant 4-Aminobenzoate Hydroxylase as a Coupling Enzyme./[The Journal of Biochemistry]

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EID
65098
EOID
933815
Map
0
LastModified
2018年12月3日(月) 13:07:25
Operator
大家 隆弘
Avail
TRUE
Censor
0
Owner
佐藤 高則
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種別 必須 学術論文(審査論文)
言語 必須 英語
招待 推奨
審査 推奨 Peer Review
カテゴリ 推奨 研究
共著種別 推奨
学究種別 推奨
組織 推奨
  1. 青山学院大学.理工学部
著者 必須
  1. (英) Mizutani Yukihito
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  2. (英) Narikawa Tatsuya
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  3. 佐藤 高則
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  4. (英) Sakurai Nobuhiko
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  5. (英) Kaji Hiroyuki
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  6. (英) Yamada Shingo
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  7. (英) Samejima Tatsuya
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
題名 必須

(英) A New UV Method for Serum γ-Glutamyltransferase Assay Using Recombinant 4-Aminobenzoate Hydroxylase as a Coupling Enzyme.

副題 任意
要約 任意

(英) 4-aminobenzoate hydroxylase (4ABH) is a flavin-dependent monooxygenase that catalyzes the decarboxylative hydroxylation of 4-aminobenzoate to 4-hydroxyaniline. For use as a clinical reagent, the gene encoding 4ABH from Agaricus bisporus was cloned by the RACE method. Also, the cDNA encoding 4ABH was expressed in Escherichia coli cells as a fusion protein with glutathione S-transferase (GST). The expressed GST-4ABH fusion protein (recombinant 4ABH) in the soluble fraction exhibits decarboxylative hydroxylation and additional NADH oxidation activities.We investigated a new ultraviolet spectrometric method for determining serum gamma-glutamyltransferase (gamma-GT) using recombinant 4ABH as a coupling enzyme. The principle of the method is as follows. Using gamma-glutamyl-3-choloro-4-aminobenzoate (L-gamma-glu-PAClBA) and glycylglycine as the donor and acceptor substrates, 3-choloro-4-aminobenzoate (PAClBA) is formed by the catalysis of serum gamma-GT. PAClBA is stoichiometrically converted to 3-choloro-4-hydroxyaniline (PHClA) and NAD(+) by 4ABH and NADH. However, NADH oxidation results in a high reagent blank, which is considered as a drawback for use as a clinical reagent. Using recombinant 4ABH, we examined the effects of pH and detergents on these two activities, and found that several detergents suppress the additional NADH oxidation activity with little or no effect on hydroxylation activity. The results indicate a promising approach to establishing an ultraviolet spectrophotometric method for determining serum gamma-GT activity using L-gamma-glu-PAClBA as the donor substrate and recombinant 4ABH as a coupling enzyme.

(日) 4-Aminobenzoate Hydroxylase (4-ABH)遺伝子をマッシュルームよりcDNAクローニングを行い,GSTとの融合タンパク質として大腸菌内で効率良く発現させた.この組換え体4-ABHを共役酵素として,血清中のγ-Glutamyltransferaseの測定系について検討を行った.その結果,4-ABHを用いた場合,従来法と良い相関を示し,今後臨床検査への応用が可能となった.

キーワード 推奨
  1. (英) Amino Acid Sequence
  2. (英) Detergents
  3. (英) Dose-Response Relationship, Drug
  4. (英) Escherichia coli
  5. (英) Hydrogen-Ion Concentration
  6. (英) Hydroxylation
  7. (英) Mixed Function Oxygenases
  8. (英) Models, Chemical
  9. (英) Molecular Sequence Data
  10. (英) Multienzyme Complexes
  11. (英) NAD
  12. (英) NADH, NADPH Oxidoreductases
  13. (英) Peroxidases
  14. (英) Protein Engineering
  15. (英) Recombinant Proteins
  16. (英) Sequence Homology, Amino Acid
  17. (英) Spectrophotometry
  18. (英) Ultraviolet Rays
  19. (英) gamma-Glutamyltransferase
発行所 推奨 日本生化学会
誌名 必須 The Journal of Biochemistry([日本生化学会])
(pISSN: 0021-924X, eISSN: 1756-2651)
ISSN 任意 0021-924X
ISSN: 0021-924X (pISSN: 0021-924X, eISSN: 1756-2651)
Title: Journal of biochemistry
Title(ISO): J Biochem
Supplier: Oxford University Press
Publisher: Oxford University Press
 (NLM Catalog  (医中誌Web  (J-STAGE  (Scopus  (CrossRef (Scopus information is found. [need login])
必須 126
必須 2
必須 347 353
都市 任意
年月日 必須 1999年 6月 1日
URL 任意
DOI 任意
PMID 任意 10423528    (→Scopusで検索)
NAID 任意
WOS 任意 000082011700014
Scopus 任意
評価値 任意
被引用数 任意
指導教員 推奨
備考 任意
  1. (英) Article.PublicationTypeList.PublicationType: Journal Article

  2. (英) Article.PublicationTypeList.PublicationType: Research Support, Non-U.S. Gov't