徳島大学 教育・研究者情報データベース(EDB)

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著作: Shimizu Atsushi/Kwon Jung-Hee/Sasaki Takashi/[佐藤 高則]/Sakurai Nobuhiko/Sakurai Takeshi/Yamaguchi Shotaro/Samejima Tatsuya/Myrothecium verrucaria Bilirubin Oxidase and Its Mutants for Potential Copper-Ligands./[Biochemistry]

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EID
65093
EOID
933806
Map
0
LastModified
2018年12月3日(月) 12:00:00
Operator
大家 隆弘
Avail
TRUE
Censor
0
Owner
佐藤 高則
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種別 必須 学術論文(審査論文)
言語 必須 英語
招待 推奨
審査 推奨 Peer Review
カテゴリ 推奨 研究
共著種別 推奨
学究種別 推奨
組織 推奨
  1. 青山学院大学.理工学部
  2. 金沢大学
  3. 天野製薬株式会社
著者 必須
  1. (英) Shimizu Atsushi
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  2. (英) Kwon Jung-Hee
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  3. (英) Sasaki Takashi
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  4. 佐藤 高則
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  5. (英) Sakurai Nobuhiko
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  6. (英) Sakurai Takeshi
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  7. (英) Yamaguchi Shotaro
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  8. (英) Samejima Tatsuya
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
題名 必須

(英) Myrothecium verrucaria Bilirubin Oxidase and Its Mutants for Potential Copper-Ligands.

副題 任意
要約 任意

(英) Bilirubin oxidase (EC:1.3.3.5) purified from a culture medium of Myrothecium verrucaria MT-1 (authentic enzyme) catalyzes the oxidation of bilirubin to biliverdin in vitro and recombinant enzyme (wild type) was obtained by using an overexpression system of the bilirubin oxidase gene with Aspergillus oryzae harboring an expression vector. The absorption and ESR spectra showed that both bilirubin oxidases are multicopper oxidases containing type 1, type 2, and type 3 coppers similar to laccase, ascorbate oxidase, and ceruloplasmin. Site-directed mutagenesis has been performed for the possible ligands of each type of copper. In some mutants, Cys457 --> Val, Ala, His94 --> Val, and His134.136 --> Val, type 1 and type 2 copper centers were perturbed completely and the enzyme activity was completely lost. Differing from the holoenzyme, these mutants showed type 3 copper signals. However, the optical and magnetic properties characteristic of type 1 copper were retained even by mutating one of the type 1 copper ligands, i.e., a mutant, Met467 --> Gly, showed a weak but apparent enzyme activity. A double mutant His456.458 --> Val had only type 1 Cu, showing a blue band at 600 nm (epsilon = 1.6 x 10(3)) and an ESR signal with very narrow hyperfine splitting (A parallel = 7.2 x 10(-)3 cm-1). Since the type 2 and type 3 coppers are not present, the mutant did not show enzyme activity. These results strongly imply that the peculiar sequence in bilirubin oxidase, His456-Cys457-His458, forms an intramolecular electron-transfer pathway between the type 1 copper site and the trinuclear center composed of the type 2 and type 3 copper sites.

(日) Myrothecium verrucaria 由来Bilirubin Oxidase遺伝子を麹菌を用いた発現系により発現させた.また,部位特異的変異法により,本酵素の銅原子リガンドと推定される部位に変異を導入した変異体を,ESRや吸収スペクトルにより分析し,銅原子リガンドを推定した.その結果より,本酵素の銅原子個数およびそのタイプや電子伝達経路についても考察を行った.

キーワード 推奨
  1. (英) Amino Acid Sequence
  2. (英) Aspergillus oryzae
  3. (英) Copper
  4. (英) Electron Spin Resonance Spectroscopy
  5. (英) Gene Expression Regulation
  6. (英) Genetic Vectors
  7. (英) Histidine
  8. (英) Ligands
  9. (英) Mitosporic Fungi
  10. (英) Models, Molecular
  11. (英) Molecular Sequence Data
  12. (英) Mutagenesis, Site-Directed
  13. (英) Oxidoreductases
  14. (英) Oxidoreductases Acting on CH-CH Group Donors
  15. (英) Recombinant Proteins
  16. (英) Valine
発行所 推奨 アメリカ化学会
誌名 必須 Biochemistry([アメリカ化学会])
(pISSN: 0006-2960, eISSN: 1520-4995)
ISSN 任意 0006-2960
ISSN: 0006-2960 (pISSN: 0006-2960, eISSN: 1520-4995)
Title: Biochemistry
Title(ISO): Biochemistry
Publisher: American Chemical Society
 (NLM Catalog  (Scopus  (CrossRef (Scopus information is found. [need login])
必須 38
必須 10
必須 3034 3042
都市 任意
年月日 必須 1999年 2月 17日
URL 任意
DOI 任意 10.1021/bi9819531    (→Scopusで検索)
PMID 任意 10074356    (→Scopusで検索)
NAID 任意
WOS 任意 000079089300020
Scopus 任意
評価値 任意
被引用数 任意
指導教員 推奨
備考 任意
  1. (英) Article.PublicationTypeList.PublicationType: Journal Article

  2. (英) Article.PublicationTypeList.PublicationType: Research Support, Non-U.S. Gov't