著作: [佐藤 高則]/Shinoda Hiroshi/Ishii Keisuke/Koyama Masayuki/Sakurai Nobuhiko/Kaji Hiroyuki/Hachimori Akira/Irie Masachika/Samejima Tatsuya/Primary Structure, Expression and Site-Directed Mutagenesis of Inorganic Pyrophosphatase from Bacillus stearothermophilus./[The Journal of Biochemistry]
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| 種別 | 必須 | 学術論文(審査論文) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 言語 | 必須 | 英語 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 招待 | 推奨 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 審査 | 推奨 | Peer Review | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| カテゴリ | 推奨 | 研究 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 共著種別 | 推奨 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 学究種別 | 推奨 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 組織 | 推奨 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 著者 | 必須 |
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| 題名 | 必須 |
(英) Primary Structure, Expression and Site-Directed Mutagenesis of Inorganic Pyrophosphatase from Bacillus stearothermophilus. |
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| 副題 | 任意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 要約 | 任意 |
(英) The complete primary structure of inorganic pyrophosphatase [EC 3.6. 1.1] from Bacillus stearothermophilus (ATCC 12016) was determined at the amino acid level by automated Edman degradation. The subunit of the enzyme consists of 164 amino acid residues with a calculated molecular mass of 18,796. The amino acid sequence of the enzyme is almost identical to that of thermophilic bacterium PS-3. Based on the determined primary structure, a PCR-amplified semi-synthetic gene was constructed and expressed in Escherichia coli JM109. The recombinant Bst. PPase showed the same characteristics and activity as the authentic enzyme, and exhibits higher thermostability than the E. coli enzyme. Furthermore, we prepared tyrosine-substituted variants by site-directed mutagenesis to elucidate the role of two highly conserved tyrosines (Y46 and Y130). As a result, two variants, Y46F and Y130F, lost most of their enzyme activity, whereas their conformations were unaffected. However, the wild-type and two variants exhibited different thermostability behaviors in the presence or absence of Mg2+. Therefore, these tyrosines may contribute to the structural integrity of the active site of the enzyme. (日) 中等度好熱性細菌Bacillus stearothermophilusより，無機ピロリン酸加水分解酵素の半合成遺伝子を作製し，大腸菌により発現させた．得られた組み換え体酵素は，天然の本酵素と同等の酵素活性および耐熱性を示した． さらに，本酵素のTyr46, Tyr130について，部位特異的変異法により作製した変異体の解析より，これらの残基の活性および耐熱性への寄与が明らかとなった． |
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| キーワード | 推奨 |
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| 発行所 | 推奨 | 日本生化学会 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 誌名 | 必須 |
The Journal of Biochemistry([日本生化学会])
(pISSN: 0021-924X, eISSN: 1756-2651)
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| 巻 | 必須 | 125 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 号 | 必須 | 1 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 頁 | 必須 | 48 57 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 都市 | 任意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 年月日 | 必須 | 1999年 1月 1日 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| URL | 任意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| DOI | 任意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| PMID | 任意 | 9880796 (→Scopusで検索) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CRID | 任意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| WOS | 000078361100009 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Scopus | 任意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| researchmap | 任意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 評価値 | 任意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 被引用数 | 任意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 指導教員 | 推奨 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 備考 | 任意 |
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