徳島大学 教育・研究者情報データベース(EDB)

Education and Research Database (EDB), Tokushima University

徳島大学ウェブサイトへのリンク

著作: [佐藤 高則]/Samejima Tatsuya/Watanabe Machiko/Nogi Shin-ichi/Takahashi Yoshimasa/Kaji Hiroyuki/Teplyakov Alexei/Obmolova Galya/Kuranova Inna/Ishii Keisuke/Molecular Cloning, Expression and Site-Directed Mutagenesis of Inorganic Pyrophosphatase from Thermus thermophilus HB8/[The Journal of Biochemistry]

ヘルプを読む

「著作」(著作(著書,論文,レター,国際会議など))は,研究業績にかかる著作(著書,論文,レター,国際会議など)を登録するテーブルです. (この情報が属するテーブルの詳細な定義を見る)

  • 項目名の部分にマウスカーソルを置いて少し待つと,項目の簡単な説明がツールチップ表示されます.

この情報をEDB閲覧画面で開く

EID
63979
EOID
934026
Map
0
LastModified
2018年12月3日(月) 14:35:20
Operator
大家 隆弘
Avail
TRUE
Censor
0
Owner
佐藤 高則
Read
継承
Write
継承
Delete
継承
種別 必須 学術論文(審査論文)
言語 必須 英語
招待 推奨
審査 推奨 Peer Review
カテゴリ 推奨 研究
共著種別 推奨
学究種別 推奨
組織 推奨
  1. 青山学院大学.理工学部
  2. Academy of Russia
著者 必須
  1. 佐藤 高則
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  2. (英) Samejima Tatsuya
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  3. (英) Watanabe Machiko
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  4. (英) Nogi Shin-ichi
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  5. (英) Takahashi Yoshimasa
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  6. (英) Kaji Hiroyuki
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  7. (英) Teplyakov Alexei
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  8. (英) Obmolova Galya
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  9. (英) Kuranova Inna
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  10. (英) Ishii Keisuke
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
題名 必須

(英) Molecular Cloning, Expression and Site-Directed Mutagenesis of Inorganic Pyrophosphatase from Thermus thermophilus HB8

副題 任意
要約 任意

(英) The genomic DNA encoding the inorganic pyrophosphatase from an extremely thermophilic bacterium, Thermus thermophilus HB8 (ATCC27634), was isolated by colony hybridization with a probe designed as a part of gene amplified by the PCR method, which was derived from the partial amino acid sequence of the enzyme. The DNA was cloned into a plasmid vector, pUC118, after digestion with BamHI. The inserted nucleotide fragment was about 1.8 kbp in length and the nucleotide sequence included a 525 bp open reading frame. The deduced amino acid sequence was completely identical with that of the enzyme determined by automated Edman analysis of peptide fragments isolated from digests obtained with Staphylococcus aureus V8 protease and Achromobacter protease I, and also from products obtained on chemical cleavage with cyanogen bromide and 70% formic acid. The subunit of this enzyme is composed of 174 amino acid residues with a calculated molecular weight of 19,084. Then, the gene was overexpressed in Escherichia coli BL21 (DE3) using a plasmid vector, pET15b, system. The recombinant enzyme was fully active, and exhibited higher thermostability than the E. coli enzyme. Amino acid residues located on the surface of the recombinant enzyme were determined by means of limited proteolysis, and the results revealed that the environment of Lys residues is almost the same as the crystal structure reported previously [Teplyakov, A. et al. (1994) Protein Sci. 3, 1098-1107]. Furthermore, the roles of two tryptophan residues were investigated by site-directed mutagenesis, which indicated that they may be responsible for the structural integrity and thermostability.

(日) 高度好熱性細菌Thermus thermophilusより,無機ピロリン酸加水分解酵素遺伝子のクロ-ニングを行ない,その全一次構造を決定した. また,大腸菌により発現させた組み換え体酵素は,十分な酵素活性および耐熱性を示した.さらに,プロテア-ゼ限定分解による溶液構造の推定や,部位特異的変異法を用いて作製した変異体の解析から,本酵素の耐熱化に寄与する部位について考察を行なった.

キーワード 推奨
  1. (英) Amino Acid Sequence
  2. (英) Amino Acid Substitution
  3. (英) Base Sequence
  4. (英) Cloning, Molecular
  5. (英) DNA, Bacterial
  6. (英) Enzyme Stability
  7. (英) Escherichia coli
  8. (英) Hydrolysis
  9. (英) Inorganic Pyrophosphatase
  10. (英) Molecular Sequence Data
  11. (英) Mutagenesis, Site-Directed
  12. (英) Pyrophosphatases
  13. (英) Recombinant Proteins
  14. (英) Sequence Homology, Amino Acid
  15. (英) Thermus thermophilus
  16. (英) Tryptophan
発行所 推奨 日本生化学会
誌名 必須 The Journal of Biochemistry([日本生化学会])
(pISSN: 0021-924X, eISSN: 1756-2651)
ISSN 任意 0021-924X
ISSN: 0021-924X (pISSN: 0021-924X, eISSN: 1756-2651)
Title: Journal of biochemistry
Title(ISO): J Biochem
Supplier: Oxford University Press
Publisher: Oxford University Press
 (NLM Catalog  (医中誌Web  (J-STAGE  (Scopus  (CrossRef (Scopus information is found. [need login])
必須 124
必須 1
必須 79 88
都市 任意
年月日 必須 1998年 1月 1日
URL 任意
DOI 任意
PMID 任意 9644249    (→Scopusで検索)
NAID 任意
WOS 任意 000074726400013
Scopus 任意
評価値 任意
被引用数 任意
指導教員 推奨
備考 任意
  1. (英) Article.DataBankList.DataBank.DataBankName: GENBANK

  2. (英) Article.DataBankList.DataBank.AccessionNumberList.AccessionNumber: AB010580

  3. (英) Article.DataBankList.DataBank.AccessionNumberList.AccessionNumber: P38576

  4. (英) Article.PublicationTypeList.PublicationType: Journal Article

  5. (英) Article.PublicationTypeList.PublicationType: Research Support, Non-U.S. Gov't