徳島大学 教育・研究者情報データベース(EDB)

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著作: Okuda Masahiko/[佐藤 高則]/Sakurai Nobuhiko/Shibuya Kazunori/Kaji Hiroyuki/Samejima Tatsuya/Overexpression in Escherichia coli of Chemically Synthesized Gene for Active 0.19 α-Amylase Inhibitor from Wheat Kernel/[The Journal of Biochemistry]

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EID
63772
EOID
948307
Map
0
LastModified
2019年6月16日(日) 21:06:05
Operator
佐藤 高則
Avail
TRUE
Censor
0
Owner
佐藤 高則
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Write
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継承
種別 必須 学術論文(審査論文)
言語 必須 英語
招待 推奨
審査 推奨 Peer Review
カテゴリ 推奨 研究
共著種別 推奨
学究種別 推奨
組織 推奨
  1. 青山学院大学.理工学部
著者 必須
  1. (英) Okuda Masahiko
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  2. 佐藤 高則
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  3. (英) Sakurai Nobuhiko
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  4. (英) Shibuya Kazunori
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  5. (英) Kaji Hiroyuki
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  6. (英) Samejima Tatsuya
    役割 任意 共著
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
題名 必須

(英) Overexpression in Escherichia coli of Chemically Synthesized Gene for Active 0.19 α-Amylase Inhibitor from Wheat Kernel

副題 任意
要約 任意

(英) A synthetic gene encoding 0.19 alpha-amylase inhibitor (alpha-AI) from wheat kernel was obtained by enzymatic assembly of 18 oligodeoxynucleotides which were chemically synthesized. The synthetic gene was introduced into vector pET15b for expression in Escherichia coli BL21(DE3) under the control of T7 promoter. However, in SDS-PAGE and Western blotting analyses of the E. coli cell lysate, the expression product could not be detected. Expression analysis for various partially deleted gene fragments suggested that the putative hairpin-like structure of mRNA in the 5'-terminal coding region might interrupt efficient expression. When the hairpin structure was eliminated by using degenerate codons, the resulting gene could be overexpressed in E. coli. Although the gene product was accumulated in an insoluble fraction as inclusion bodies, its inhibitory activity could be recovered by solubilization with 8 M urea, followed by refolding through two successive steps of dialysis at alkaline pH. After purification, the recombinant 0.19 alpha-AI showed the same characteristics as the authentic inhibitor in terms of N-terminal amino acid sequence, peptide mapping on reverse-phase HPLC, far-UV circular dichroism (CD) spectrum and have inhibition of human salivary alpha-amylase. Thus, we have established an overexpression system in E. coli for active recombinant 0.19 alpha-AI.

(日) 小麦由来0.19α-アミラ-ゼインヒビタ-(α-AI)をコ-ドする遺伝子を18本のオリゴヌクレオチドを用いて合成した.この合成遺伝子を大腸菌において発現させたところ,封入体として発現した.これを,尿素により可溶化後,溶液中の尿素濃度を減少させることにより,α-AIの立体構造の再生を行なった.得られた組換え体α-AIは,小麦由来のものと同等の阻害活性を示し,他の特性も同じであった.

キーワード 推奨
  1. (英) Amino Acid Sequence
  2. (英) Amylases
  3. (英) Base Sequence
  4. (英) Cloning, Molecular
  5. (英) Escherichia coli
  6. (英) Gene Expression Regulation, Bacterial
  7. (英) Genes, Plant
  8. (英) Genes, Synthetic
  9. (英) Genetic Vectors
  10. (英) Molecular Sequence Data
  11. (英) Plant Proteins
  12. (英) Recombinant Proteins
  13. (英) Seeds
  14. (英) Triticum
  15. (英) Trypsin Inhibitors
  16. (英) alpha-Amylases
発行所 推奨 日本生化学会
誌名 必須 The Journal of Biochemistry([日本生化学会])
(pISSN: 0021-924X, eISSN: 1756-2651)
ISSN 任意 0021-924X
ISSN: 0021-924X (pISSN: 0021-924X, eISSN: 1756-2651)
Title: Journal of biochemistry
Title(ISO): J Biochem
Supplier: Oxford University Press
Publisher: Oxford University Press
 (NLM Catalog  (医中誌Web  (J-STAGE  (Scopus  (CrossRef (Scopus information is found. [need login])
必須 122
必須 5
必須 918 926
都市 任意
年月日 必須 1997年 5月 1日
URL 任意
DOI 任意
PMID 任意 9443806    (→Scopusで検索)
NAID 任意
WOS 任意 A1997YG28000005
Scopus 任意
評価値 任意
被引用数 任意
指導教員 推奨
備考 任意
  1. (英) Article.DataBankList.DataBank.DataBankName: GENBANK

  2. (英) Article.DataBankList.DataBank.AccessionNumberList.AccessionNumber: AB003682

  3. (英) Article.PublicationTypeList.PublicationType: Journal Article