徳島大学 教育・研究者情報データベース(EDB)

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著作: Kameshita Isamu/Yamashita Sho/[片山 将一]/Senga Yukako/Sueyoshi Noriyuki/TandeMBP: generation of a unique protein substrate for protein kinase assays./[The Journal of Biochemistry]

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EID
377996
EOID
1011450
Map
0
LastModified
2021年8月3日(火) 15:58:09
Operator
片山 将一
Avail
TRUE
Censor
0
Owner
片山 将一
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種別 必須 学術論文(審査論文)
言語 必須 英語
招待 推奨
審査 推奨
カテゴリ 推奨
共著種別 推奨
学究種別 推奨
組織 推奨
著者 必須
  1. (英) Kameshita Isamu
    役割 任意
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  2. (英) Yamashita Sho
    役割 任意
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  3. 片山 将一([徳島大学.大学院医歯薬学研究部.薬学域.先端薬学教育研究プロジェクト]/[徳島大学.大学院医歯薬学研究部.薬学域.薬科学部門.生命薬学系.医薬品病態生化学])
    役割 任意
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  4. (英) Senga Yukako
    役割 任意
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  5. (英) Sueyoshi Noriyuki
    役割 任意
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
題名 必須

(英) TandeMBP: generation of a unique protein substrate for protein kinase assays.
副題 任意
要約 任意

(英) Myelin basic protein (MBP) is one of the major components of central nervous system myelin and has multiple sites for protein phosphorylation. Therefore, it has been widely used as a substrate for in vitro assays of various protein kinases. In this study, to obtain more efficient substrates for protein kinase assays than commercially available MBP from bovine brain, we produced various recombinant MBPs using Escherichia coli expression systems. Three splice isoforms of mouse MBP were expressed in E. coli and successfully purified using a new protocol consisting of HCl extraction, urea treatment and affinity purification with HiTrap Chelating HP column. The recombinant MBP isoforms thus obtained served as more efficient substrates for protein kinases than MBP isolated from bovine brain. To generate an even better substrate for protein kinase assays, we produced a hybrid protein composed of two different MBP isoforms connected in tandem, designated TandeMBP. TandeMBP was readily expressed in E. coli and could be purified by the newly developed simple procedure. TandeMBP was phosphorylated by various Ser/Thr protein kinases more efficiently than the other MBP isoforms. Taken together, TandeMBP will become a powerful tool for in vitro assays to analyse various protein kinase activities.
キーワード 推奨
  1. (英) Amino Acid Sequence
  2. (英) Animals
  3. (英) Blotting, Western
  4. (英) Cattle
  5. (英) Enzyme Assays
  6. (英) Molecular Sequence Data
  7. (英) Myelin Basic Protein
  8. (英) Phosphorylation
  9. (英) Protein Isoforms
  10. (英) Protein Kinases
  11. (英) Recombinant Fusion Proteins
  12. (英) Reproducibility of Results
  13. (英) Sequence Homology, Amino Acid
  14. (英) Substrate Specificity
発行所 推奨
誌名 必須 The Journal of Biochemistry([日本生化学会])
(pISSN: 0021-924X, eISSN: 1756-2651)
ISSN 任意 1756-2651
ISSN: 0021-924X (pISSN: 0021-924X, eISSN: 1756-2651)
Title: Journal of biochemistry
Title(ISO): J Biochem
Supplier: Oxford University Press
Publisher: Oxford University Press
 (NLM Catalog)   (医中誌Web)   (J-STAGE)   (Scopus)   (CrossRef)  (Scopus information is found. [need login])
巻 必須 156
号 必須 3
頁 必須 147 154
都市 任意
年月日 必須 2014年 4月 8日
URL 任意
DOI 任意 10.1093/jb/mvu025    (→Scopusで検索)
PMID 任意 24713852    (→Scopusで検索)
CRID 任意
WOS 任意
Scopus 任意
評価値 任意
被引用数 任意
指導教員 推奨
備考 任意

  1. (英) PublicationType: Journal Article

  2. (英) PublicationType: Research Support, Non-U.S. Gov't