著作: Sugiyama Yasunori/Yamashita Sho/Uezato Yuuki/Senga Yukako/[片山 将一]/Goshima Naoki/Shigeri Yasushi/Sueyoshi Noriyuki/Kameshita Isamu/Phosphorylated TandeMBP: A unique protein substrate for protein phosphatase assay./[Analytical Biochemistry: Methods in the Biological Sciences]
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| 言語 | 必須 | 英語 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 招待 | 推奨 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 審査 | 推奨 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| カテゴリ | 推奨 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 共著種別 | 推奨 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 学究種別 | 推奨 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 組織 | 推奨 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 著者 | 必須 |
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| 題名 | 必須 |
(英) Phosphorylated TandeMBP: A unique protein substrate for protein phosphatase assay. |
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| 副題 | 任意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 要約 | 任意 |
(英) To analyze a variety of protein phosphatases, we developed phosphorylated TandeMBP (P-TandeMBP), in which two different mouse myelin basic protein isoforms were fused in tandem, as a protein phosphatase substrate. P-TandeMBP was prepared efficiently in four steps: (1) phosphorylation of TandeMBP by a protein kinase mixture (Ca(2+)/calmodulin-dependent protein kinase Iδ, casein kinase 1δ, and extracellular signal-regulated kinase 2); (2) precipitation of both P-TandeMBP and protein kinases to remove ATP, Pi, and ADP; (3) acid extraction of P-TandeMBP with HCl to remove protein kinases; and (4) neutralization of the solution that contains P-TandeMBP with Tris. In combination with the malachite green assay, P-TandeMBP can be used to detect protein phosphatase activity without using radioactive materials. Moreover, P-TandeMBP served as an efficient substrate for PPM family phosphatases (PPM1A, PPM1B, PPM1D, PPM1F, PPM1G, PPM1H, PPM1K, and PPM1M) and PPP family phosphatase PP5. Various phosphatase activities were also detected with high sensitivity in gel filtration fractions from mouse brain using P-TandeMBP. These results indicate that P-TandeMBP might be a powerful tool for the detection of protein phosphatase activities. |
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| キーワード | 推奨 |
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| 発行所 | 推奨 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 誌名 | 必須 |
Analytical Biochemistry: Methods in the Biological Sciences([Elsevier Science])
(pISSN: 0003-2697, eISSN: 1096-0309)
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| 巻 | 必須 | 513 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 号 | 必須 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 頁 | 必須 | 47 53 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 都市 | 任意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 年月日 | 必須 | 2016年 8月 24日 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| URL | 任意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| DOI | 任意 | 10.1016/j.ab.2016.08.020 (→Scopusで検索) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| PMID | 任意 | 27565380 (→Scopusで検索) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CRID | 任意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| WOS | 任意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Scopus | 任意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 評価値 | 任意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 被引用数 | 任意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 指導教員 | 推奨 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 備考 | 任意 |
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