著作: Senga Yukako/Akizuki Kazutoshi/[片山 将一]/Shigeri Yasushi/Kameshita Isamu/Ishida Atsuhiko/Sueyoshi Noriyuki/High-performance CaMKI: A highly active and stable form of CaMKIδ produced by high-level soluble expression in Escherichia coli./[Biochemical and Biophysical Research Communications]
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| 言語 | 必須 | 英語 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 審査 | 推奨 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 学究種別 | 推奨 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 組織 | 推奨 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 著者 | 必須 |
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| 題名 | 必須 |
(英) High-performance CaMKI: A highly active and stable form of CaMKIδ produced by high-level soluble expression in Escherichia coli. |
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| 副題 | 任意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 要約 | 任意 |
(英) We describe here the expression and characterization of a constitutively active fragment of zebrafish Ca(2+)/calmodulin-dependent protein kinase (CaMK) Iδ designated zCaMKIδ(1-299) that lacks an autoinhibitory domain. We used a simple one-step purification method to isolate the recombinant enzyme at high yield (220 mg/l of the culture medium) from the soluble fraction of lysates prepared from Escherichia coli. Unlike the corresponding fragment of CaMKIα (CaMKΙα(1-294)), the kinase activity of zCaMKIδ(1-299), without activation procedures, was comparable to that of wild-type zCaMKIδ activated by CaMK kinase. zCaMKIδ(1-299) exhibited broad substrate specificity highly similar to that of wild-type zCaMKIδ, and complementary to that of the cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit (PKAc). The protein kinase activity of zCaMKIδ(1-299) was higher compared with that of PKAc as well as CX-30K-CaMKII that comprises a constitutively active fragment of CaMKII fused to the N-terminal region of Xenopus CaMKI. Furthermore, kinase activity was highly stable against thermal inactivation and repeated freezing-thawing. Thus, zCaMKIδ(1-299) represents a readily available alternative that can be used as a "High-performance phosphorylating reagent" alone or in combination with PKAc in diverse experiments on protein phosphorylation and dephosphorylation. |
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| キーワード | 推奨 |
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| 発行所 | 推奨 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 誌名 | 必須 |
Biochemical and Biophysical Research Communications([Elsevier])
(pISSN: 0006-291X, eISSN: 1090-2104)
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| 巻 | 必須 | 475 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 号 | 必須 | 3 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 頁 | 必須 | 277 282 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 都市 | 任意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 年月日 | 必須 | 2016年 5月 17日 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| URL | 任意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| DOI | 任意 | 10.1016/j.bbrc.2016.05.060 (→Scopusで検索) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| PMID | 任意 | 27207832 (→Scopusで検索) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CRID | 任意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Scopus | 任意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| researchmap | 任意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 評価値 | 任意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 被引用数 | 任意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 指導教員 | 推奨 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 備考 | 任意 |
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