徳島大学 教育・研究者情報データベース(EDB)

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著作: [谷原 史倫]/[平田 真樹]/NGUYEN NHIEN THI/LE ANH QUYNH/平野 隆之/[音井 威重]/Effects of concentration of CRISPR/Cas9 components on genetic mosaicism in cytoplasmic microinjected porcine embryos./[The Journal of Reproduction and Development]

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EID
350607
EOID
957772
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0
LastModified
2019年8月20日(火) 19:31:23
Operator
谷原 史倫
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TRUE
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0
Owner
谷原 史倫
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種別 必須 学術論文(審査論文)
言語 必須 英語
招待 推奨
審査 推奨
カテゴリ 推奨
共著種別 推奨 学内共著(徳島大学内研究者との共同研究 (学外研究者を含まない))
学究種別 推奨
組織 推奨
著者 必須
  1. 谷原 史倫
    役割 任意
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  2. 平田 真樹([徳島大学.バイオイノベーション研究所])
    役割 任意
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
  3. (英) Nguyen Thi Nhien / (日) NGUYEN NHIEN THI / (読) ぐえん にえん てぃ
    役割 任意
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨 ****
  4. (英) LE Anh Quynh / (日) LE ANH QUYNH / (読) り あん くい ん
    役割 任意
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨 ****
  5. (英) Hirano Takayuki / (日) 平野 隆之 / (読) ひらの たかゆき
    役割 任意
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨 ****
  6. 音井 威重([徳島大学.バイオイノベーション研究所])
    役割 任意
    貢献度 任意
    学籍番号 推奨
題名 必須

(英) Effects of concentration of CRISPR/Cas9 components on genetic mosaicism in cytoplasmic microinjected porcine embryos.

副題 任意
要約 任意

(英) Cytoplasmic microinjection (CI) of the CRISPR/Cas9 system enabled the induction of site-specific mutations in porcine zygotes and resulting pigs. However, mosaicism is a serious problem for genetically modified pigs. In the present study, we investigated suitable timing and concentration of CRISPR/Cas9 components for introduction into oocytes/zygotes by CI, to reduce mosaicism in the resulting blastocysts. First, we introduced 20 ng/ l of Cas9 protein and guide RNA (gRNA), targeting the -1,3-galactosyltransferase (GalT) gene in oocytes before in vitro fertilization (IVF), in zygotes after IVF, or in oocytes/zygotes before and after IVF, twice. CI treatment had no detrimental effects on blastocyst formation rates. The highest value of the rate of mutant blastocysts was observed in zygotes injected after IVF. Next, we injected Cas9 protein and gRNA into zygotes after IVF at a concentration of 20 ng/ l each (20 ng/ l group) or 100 ng/ l each (100 ng/ l group). The ratio of the number of blastocysts that carried mutations to the total number of blastocysts examined in the 100 ng/ l group was significantly higher (P < 0.05) than that in the 20 ng/ l group. Although no blastocysts from the 20 ng/ l group carried a biallelic mutation, 16.7% of blastocysts from the 100 ng/ l group carried a biallelic mutation. In conclusion, increasing the concentration of Cas9 protein and gRNA is effective in generating biallelic mutant blastocysts. To reduce mosaicism, however, further optimization of the timing of CI, and the concentration of CRISPR/Cas9 components, is needed.

キーワード 推奨
発行所 推奨
誌名 必須 The Journal of Reproduction and Development(日本繁殖生物学会)
(pISSN: 0916-8818, eISSN: 1348-4400)
ISSN 任意 1348-4400
ISSN: 0916-8818 (pISSN: 0916-8818, eISSN: 1348-4400)
Title: The Journal of reproduction and development
Title(ISO): J Reprod Dev
Supplier: 公益社団法人 日本繁殖生物学会
Publisher: Japanese Society of Animal Reproduction (JSAR)
 (NLM Catalog  (医中誌Web  (J-STAGE  (Scopus  (CrossRef (Scopus information is found. [need login])
必須 65
必須 3
必須 209 214
都市 任意
年月日 必須 2019年 2月 5日
URL 任意
DOI 任意 10.1262/jrd.2018-116    (→Scopusで検索)
PMID 任意 30726783    (→Scopusで検索)
CRID 任意
WOS 任意
Scopus 任意 2-s2.0-85068233108
評価値 任意
被引用数 任意
指導教員 推奨
備考 任意
  1. (英) Article.ELocationID: 10.1262/jrd.2018-116

  2. (英) Article.PublicationTypeList.PublicationType: Journal Article

  3. (英) KeywordList.Keyword: CRISPR/Cas9

  4. (英) KeywordList.Keyword: Cytoplasmic microinjection

  5. (英) KeywordList.Keyword: Gene editing

  6. (英) KeywordList.Keyword: Mosaicism

  7. (英) KeywordList.Keyword: Porcine zygote