著作: [谷原 史倫]/[平田 真樹]/NGUYEN NHIEN THI/LE ANH QUYNH/平野 隆之/[音井 威重]/Effects of concentration of CRISPR/Cas9 components on genetic mosaicism in cytoplasmic microinjected porcine embryos./[The Journal of Reproduction and Development]
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| 言語 | 必須 | 英語 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 招待 | 推奨 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 審査 | 推奨 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| カテゴリ | 推奨 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 共著種別 | 推奨 | 学内共著(徳島大学内研究者との共同研究 (学外研究者を含まない)) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 学究種別 | 推奨 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 組織 | 推奨 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 著者 | 必須 |
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| 題名 | 必須 |
(英) Effects of concentration of CRISPR/Cas9 components on genetic mosaicism in cytoplasmic microinjected porcine embryos. |
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| 副題 | 任意 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 要約 | 任意 |
(英) Cytoplasmic microinjection (CI) of the CRISPR/Cas9 system enabled the induction of site-specific mutations in porcine zygotes and resulting pigs. However, mosaicism is a serious problem for genetically modified pigs. In the present study, we investigated suitable timing and concentration of CRISPR/Cas9 components for introduction into oocytes/zygotes by CI, to reduce mosaicism in the resulting blastocysts. First, we introduced 20 ng/ l of Cas9 protein and guide RNA (gRNA), targeting the -1,3-galactosyltransferase (GalT) gene in oocytes before in vitro fertilization (IVF), in zygotes after IVF, or in oocytes/zygotes before and after IVF, twice. CI treatment had no detrimental effects on blastocyst formation rates. The highest value of the rate of mutant blastocysts was observed in zygotes injected after IVF. Next, we injected Cas9 protein and gRNA into zygotes after IVF at a concentration of 20 ng/ l each (20 ng/ l group) or 100 ng/ l each (100 ng/ l group). The ratio of the number of blastocysts that carried mutations to the total number of blastocysts examined in the 100 ng/ l group was significantly higher (P < 0.05) than that in the 20 ng/ l group. Although no blastocysts from the 20 ng/ l group carried a biallelic mutation, 16.7% of blastocysts from the 100 ng/ l group carried a biallelic mutation. In conclusion, increasing the concentration of Cas9 protein and gRNA is effective in generating biallelic mutant blastocysts. To reduce mosaicism, however, further optimization of the timing of CI, and the concentration of CRISPR/Cas9 components, is needed. |
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| キーワード | 推奨 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 発行所 | 推奨 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 誌名 | 必須 |
The Journal of Reproduction and Development(日本繁殖生物学会)
(pISSN: 0916-8818, eISSN: 1348-4400)
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| 巻 | 必須 | 65 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 号 | 必須 | 3 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 頁 | 必須 | 209 214 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 都市 | 任意 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 年月日 | 必須 | 2019年 2月 5日 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| URL | 任意 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| DOI | 任意 | 10.1262/jrd.2018-116 (→Scopusで検索) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| PMID | 任意 | 30726783 (→Scopusで検索) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CRID | 任意 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| WOS | 任意 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Scopus | 任意 | 2-s2.0-85068233108 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 評価値 | 任意 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 被引用数 | 任意 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 指導教員 | 推奨 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 備考 | 任意 |
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